Rev. Fac. Agron. (LUZ). 1999, 16 Supl. 1: 76-81
Establecimiento aséptico de brotes laterales de Annona spp.1
Aseptic establishment of Annona spp. lateral shoots
Recibido el 29-04-1999 l Aceptado
el 16-09-1999
1 Trabajo financiado parcialmente por CONDES-LUZ bajo el Proyecto 01458-98.
2 Ingeniero Agrónomo. Facultad de Agronomía. La Universidad del Zulia (LUZ).
3 Departamento de Química. Facultad de Agronomía. LUZ. Apartado 15205. Maracaibo,
Zulia 4005. Venezuela.
4 Departamento de Estadística. Facultad de Agronomía. LUZ. Apartado 15205.
Maracaibo, Zulia 4005. Venezuela.
5 Departamento de Botánica. Facultad de Agronomía. LUZ. Apartado 15205.
Maracaibo, Zulia 4005. Venezuela
A. Rincón2, R. Ortega2, J. Urdaneta2,
S. León de Sierralta3, B. Bracho4 y M. Ramírez5
Resumen
Con el propósito de desarrollar un método de desinfección
superficial para el establecimiento de brotes laterales de Annona muricata y A.
glabra se evaluó el uso de pretratamientos con fungicida y antibiótico en plantas
donantes adultas con seis años de edad provenientes del campo (CENFRUZU-CORPOZULIA). Se
despuntaron y defoliaron seis ramas por planta para inducir brotación, se cubrieron con
mallas para blanqueo, de las cuales tres se asperjaron con RidomilÒ y rifampicina a razón de 2 g L-1 y 300 mg L-1, respectivamente;
cinco y un día antes de la recolección. Al desinfectar superficialmente, los explantes
se colocaron en RidomilÒ y luego en rifampicina,
después del tratamiento con cloro comercial. El diseño experimental fue totalmente al
azar, con arreglo factorial 22 y cinco repeticiones. A los 14 días de cultivo,
se midió el porcentaje de contaminación (PC) y de supervivencia (PS). El PC fue de 0 %
en ambas especies y el PS mostró diferencias (P<0,001) entre pretratamientos, 10 y 8 %
con aplicación y 55 y 28 % sin aplicación para A. glabra y A. muricata, respectivamente. Los resultados indican que el pretratamiento no es requerido.
Palabras clave: pretratamientos, planta donante del campo, in vitro.
Abstract
In order to develop a surface disinfection method for the in vitro establishment of lateral shoots of Annona muricata and A. glabra,
pretreatments with fungicides and antibiotics on field-grown six year old mature plants
were evaluated at CENFRUZU-CORPOZULIA. Six canes per plant were defoliated and the shoot
tip removed to induce bud break, the canes were covered with polythene sheeting to reduce
irradiance. A Spray of 2 g L-1 of RidomilÒ and 300 mg L-1 of rifampicine was applied to the canes 5 days and 1 day before
harvesting. When surface disinfected, the explants were treated with RidomilÒ and the rifampicine after treatment with the
hypochlorite solution. The experimental design was completely randomized with a factorial
array of 22 and five repetitions. Observations on percentage of contamination
(PC) and survival (PS) were recorded. The PC was 0 % for both species, but for the PS the
ANOVA showed differences (P<0,01) between methods, 10 and 8 % of PS using pretreatment
and 55 % and 28 % without pretreatment for A. glabra and A. muricata,
respectively. The results revealed that the pretreatment was not required.
Keys word: pretreatments, field grown stock plants, in vitro.
Introducción
Los frutales en Venezuela constituyen un renglón que ocupa una
posición destacada en el sector agrícola, por su elevado aporte al valor total de la
producción. Entre éstos, el guanábano (Annona muricata L.) tiene un gran
potencial por su adaptabilidad, producción, y valor nutritivo, ya que por su delicioso
sabor se consume como fruta fresca, en forma de helados, conservas y bebidas. También con
la pulpa cocida se prepara un dulce para rellenar partes de pastelería y fabricar jaleas
(2).
Las especies de Annona se han propagado normalmente por semilla
y los métodos convencionales de propagación vegetativa son muy lentos. El método de propagación
in vitro sería de gran utilidad para la multiplicación de estas especies y el
mejoramiento genético, el cual ha sido dificultoso (3).
Existe información relacionada con la regeneración in vitro de
algunas especies de Annona, entre ellas A. muricata, para la cual se ha
utilizado material juvenil (3, 5) y adulto (5), sin embargo, el material adulto que se ha
evaluado ha sido recolectado de invernadero.
El desarrollo de una técnica que permita propagar in vitro material adulto recolectado en el campo facilitaría el proceso de selección y
multiplicación de plantas elitescas. Para ello es prioritario establecer una metodología
efectiva que permita el establecimiento aséptico de explantes viables.
El establecimiento in vitro de explantes provenientes del campo
depende entre otros factores del control de microorganismos contaminantes y del
oscurecimiento. El uso de desinfectantes tradicionales, poda y sombreamiento en guanábano
(1) y guayabo (6, 8, 9) permitió el establecimiento de material adulto proveniente del
campo.
Este trabajo describe una metodología para el establecimiento
aséptico de brotes laterales de plantas adultas de A. muricata y A. glabra recolectados en el campo.
Materiales y métodos
Se seleccionaron cuatro plantas adultas de Annona muricata L. y A.
glabra L de seis años, ambas especies pertenecen al orden Ranales y a la familia
Annonaceae (Avilán, 1992), cultivadas en el Campo Experimental del Centro Frutícola del
Zulia (CENFRUZU-CORPOZULIA) ubicado en la altiplanicie de Maracaibo a 66 m.s.n.m. (LN 11º
00´; LO 72º 00´), zona de vida bosque muy seco tropical.
En cada planta se seleccionaron de cinco a seis ramas que se defoliaron
y despuntaron en el segundo nudo, del ápice a la base, para inducir la brotación de
yemas laterales. Las ramas se cubrieron con una malla que permitió el paso del 26,66 % de
luz, la cual hizo un efecto de sombreamiento y permitió el intercambio gaseoso.
Transcurridos 15 días, en cada árbol se tomaron de manera aleatoria de dos a tres ramas,
se asperjaron con Ridomil-MZÒ [N-(2,6-dimetilfenil)-N-(metoxiacetil)-alaninametil éster] y rifampicina (antibiótico) a
una dosis de 2 g L-1 y 300 mg L-1 y se identificaron. Las
aspersiones se hicieron 5 y 1 día antes de la recolección del material vegetal en ambas
especies (8).
Se colectaron los cinco primeros brotes laterales de cada rama, éstos
se sumergieron en solución antioxidante SIGMA (ácido cítrico y ácido ascórbico) hasta
el momento de la desinfección superficial, para lo cual se empleó la descrita por
Ramírez (9) con algunas modificaciones. Se utilizaron los ápices de los brotes como
explantes, colocándolos por 10 min en agua jabonosa, seguidamente se sumergieron por 5
min en cloro comercial al 50% v/v (hipoclorito de sodio al 5,25 i.a)
y se enjuagaron tres veces con agua bidestilada-esterilizada. Seguidamente se expusieron
en RidomilÒ (2 g L-1) y finalmente en
rifampicina (300 mg L-1) durante 20 min cada uno.
Los explantes se sembraron en tubos de ensayo (150 mm x 25 mm) con 10
mL de medio nutritivo líquido de Murashige y Skoog (7) modificado (Sigma M0153, mitad de
la concentración de los macronutrientes), complementado con 20 g L-1 de
sacarosa, utilizando como soporte puentes de papel Bond N° 20 (75 g m-2). El
pH del medio fue ajustado a 5,8 antes de esterilizarlo a 121ºC y 1,1 kg cm-2 por 15 min. La temperatura de la incubadora fue de 25 ºC y el fotoperíodo de 12 horas
luz con una intensidad luminosa de 19 mmol m-2 s-1.
Se utilizó un diseño experimental totalmente al azar con 5
repeticiones y un arreglo factorial 22 correspondiente a dos especies y dos
pretratamientos. La unidad experimental estaba constituida por 5 explantes. Las variables
respuestas correspondieron a porcentaje de contaminación y supervivencia evaluadas a los
14 días después de la siembra. El análisis estadístico se realizó utilizando el
procedimiento para datos desbalanceados (10), transformándolos mediante la raíz cuadrada
del porcentaje en decimal más uno, por no seguir una distribución normal y así lograr
el ajuste de la normalidad.
Resultados y discusión
El porcentaje de contaminación fue 0 % en ambas especies, por lo que
se considera que la aplicación de RidomilÒ y
rifampicina en plantas madres de A. muricata y A. glabra cultivadas en el
campo posiblemente no es necesaria si se realiza una buena desinfección en el laboratorio
(9), coincidiendo con lo reportado por Somarribas et al. (11), quiénes señalaron
que la contaminación ocurre usualmente por una inadecuada manera de trabajar en
condiciones asépticas o por el uso de una insuficiente desinfección superficial del
explante y por la presencia de microorganismos endógenos.
Lemos y Blake (5) obtuvieron explantes asépticos de A. muricata utilizando segmentos nodales tomados de plantas madres cultivadas en invernaderos, lo que
confiere una situación diferente a la de este experimento.
Como se observa en la figura 1 los porcentajes promedio de
supervivencia son bajos en forma general, sin embargo son considerablemente más altos
para aquellas plantas o ramas que no fueron tratadas en el campo con RidomilÒ. Esto podría atribuirse, entre otros factores a la
posible oxidación del material. Jordan et al. (4) reportaron el mismo problema en
el cultivo de A. cherimola haciendo referencia a la presencia de fenoles y
polifenoxidasas, que son comunes en estas especies.
Los bajos porcentajes de supervivencia también podrían atribuirse al
tiempo de inmersión de los explantes en el fungicida, ya que se notó un quemado en los
explantes, coincidiendo con lo observado en guayabo cuando se utilizó RidomilÒ (9). El hipoclorito de sodio posiblemente condicionó la
acción del fungicida.
Al evaluar el porcentaje de supervivencia de los explantes, el
análisis estadístico arrojó diferencias (P<0,01) entre los pretratamientos, no
siendo así para el efecto especie y la interacción especie-pretratamiento. Estas
diferencias se presume que se deban a una disminución de los porcentajes de supervivencia
de los explantes tratados en el campo, lo cual podría atribuirse a un tipo de toxicidad
del fungicida o la mezcla de éste con el antibiótico.
T1 = Annona glabra sin aplicación. T3 = Annona muricata sin aplicación.
T2 = Annona glabra con aplicación. T4 = Annona muricata con aplicación.
Figura 1. Porcentajes de supervivencia de explantes de Annona
muricata L. y A. glabra L. tratados y no tratados en el campo con RidomilÒ
Conclusiones y recomendaciones
La aspersión con RidomilÒ y
rifampicina a plantas madres de A. muricata y A. glabra para las condiciones
de este experimento no fue necesaria en la obtención de explantes asépticos.
Para la obtención de explantes asépticos de A. muricata y A.
glabra, bajo las condiciones de realización de este experimento, no se justifica la
aplicación de aspersiones a las plantas madres con RidomilÒ y rifampicina.
Las dosis de hipoclorito de sodio y fungicida utilizadas en el
laboratorio posiblemente afectan el porcentaje de supervivencia de los explantes.
Se sugiere no hacer aplicxaciones de RidomilÒ y rifampicina en el campo.
Estudiar el efecto de soluciones antioxidantes sobre la oxidación de
explantes de Annona spp.
Realizar estudios para evaluar el efecto de diferentes dosis de
hipoclorito de sodio, RidomilÒ y rifampicina, y la
utilización de otros fungicidas para la desinfección superficial de los explantes.
Literatura citada
1-. Albornoz, L.; L. Fernández, S. León de S. y C. Castro de Rincón.
1993. Efecto del tratamiento de plantas donantes y del número de explantes a utilizar
para el control de la contaminación y oscurecimiento en el cultivo de Annona muricata L.
En Memorias: VI Jornadas Científico Técnicas de la Facultad de Agronomía (LU.Z.).
2-. Avilán, L.; F. Leal, y D. Batista. 1992. Manual de Fruticultura.
Editorial América C.A. Caracas. Venezuela. 1469 p.
3-. Bejoy, M. and M. Hariharan. 1992. In vitro plantlet
differentiation in Annona muricata L. Plant Cell Tissue and Organ Culture 31:
245-247.
4-. Jordan, M.; M. Obando, L. Inturriaga, A. Goreux y J. Velozo. 1993.
Organogenesis and regeneration of some andean and Fruit especies. Acta Horticulturae: 336.
5-. Lemos, B. and J. Blake. 1996. Micropropagation of juvenile and
mature Annona muricata L. Journal of Horticultural Science 72: 395-403.
6-. León de Sierralta, S. , L., Arenas de Moreno y Z., Viloria. 1997.
Efecto de la exposición solar de las plantas donantes en la iniciación del cultivo in
vitro de guayabo (Psidium guajava L.). Revista de la Facultad de Agronomía.
(L.U.Z.) 14 (1): 43-53.
7-. Murashige, T. y F. Skoog. 1962. A revised medium for rapid growth
and bioassays with tabacco tissue cultures. Physiol. Plant. 15: 473 - 493.
8-. Ramírez, M.; S. León de S., M. Marín y A. Nava. 1997. Efecto del
tipo de explante y tratamientos a plantas madres en el cultivo in vitro de
segmentos nodales de Psidium guajava L. En Memorias: VI Congreso Nacional de
Fruticultura, Barquisimeto, Venezuela. p.76.
9-. Ramírez, M. 1998. Tratamientos a plantas madres y al explante para
el establecimiento in vitro del guayabo (Psidium guajava L.). Trabajo de
Grado. Maracaibo: La Universidad del Zulia. Facultad de Agronomía. División de Estudios
para Graduados. Programa Fruticultura. 132 p.
10-. SAS, Institute, Inc. 1987. SAS (Statistical Analysis System) The
Institute INC, Cary, NC, USA.
11-. Somarribas, G.; J. Sandoval, y L Müller. 1991. Propagación
vegetativa del Chayote Sechium edule (Jacq.) Sw. Fases de establecimiento.
Turrialba. 41: 538-544.
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