Rev. Fac. Agron. (LUZ). 1999, 16 Supl. 1: 196-205
Método de extracción líquido-sólido para el análisis de residuos de
plaguicidas N-Metil carbamatos en aguas
Liquid-solid extraction method for the analysis of N-Methyl carbamates
pesticide residues in water
Recibido el 28-04-1999 l Aceptado el 23-07-1999
1. Proyecto financiado por CONDES y CONICIT.
2. Dpto. de Química, Facultad de Agronomía, La Universidad del Zulia, Apdo.15205,
e-mail: ibuscema@luz.ve, Maracaibo - Venezuela.
I. Buscema , G. Ettiene2, D. Medina2 y A. Prieto2
Resumen
Los plaguicidas Carbamatos son muy empleados en las actividades
agrícolas y pecuarias, trayendo como consecuencia la contaminación de afluentes de aguas
cercanos a estas áreas. Según concierne a los autores de este trabajo, en nuestro país
no existen estudios acerca de métodos rápidos y económicos que permitan determinar y
cuantificar la presencia de estos plaguicidas. Es por esto el interés de establecer un
método que sea capaz de extraer con eficiencia un gran número de plaguicidas contenidos
en muestras de agua. En este trabajo se empleó el carbón grafitado bajo diferentes
condiciones para la extracción de residuos de 8 plaguicidas carbamatos en muestras de
agua y su posterior análisis por cromatografía de gas capilar usando un detector
selectivo nitrógeno-fosfóro. Los ensayos realizados permitieron establecer las
condiciones adecuadas para la extracción de los plaguicidas en muestras de agua, la cual
se describe como condición 6. Para esta condición los porcentajes de recuperación de
los 8 plaguicidas se ubicaron entre 85 y 105 %, encontrándose dichos porcentajes de
recuperación dentro del rango de eficiencia sugerido por la Environmental Protection
Agency de los Estados Unidos para el análisis de plaguicidas en aguas.
Palabras clave: extracción líquido-sólido, carbón grafitado, plaguicidas,
carbamatos.
Abstract
The carbamate pesticides are frequently used in the agricultural
activities that could cause contamination of the water affluents located near these areas.
In our country there are few studies concerning fast and inexpensive method that could
lead the identification and quantification of the pesticides. This work used carbopack
cartridge, under different conditions, for the extraction of the residues of pesticides in
water samples (8 carbamates), gas chromatography analysis, with a selective nitrogen -
phosphorous detector was also used. The results showed that the conditions given in the
procedure 6 are appropriate as it was showed by the recovery percentages of the
carbamates, between 85 and 105 %. The pesticides were recovered efficiently. The results
are in the range recommended (70 - 130 %) by the Environmental Protection Agency of the
United States of America for the analysis of pesticides in water.
Key words: solid phase extraction, graphitized carbon black, pesticides,
carbamates.
Introducción
La contaminación de aguas naturales por residuos de plaguicidas
carbamatos, puede perturbar el balance de los sistemas ecológicos, lo cual plantea la
necesidad de realizar análisis de residuos de plaguicidas en éste tipo de muestra. Estos
análisis son reconocidos como complejos (12), por las diferentes propiedades físicas y
químicas de los plaguicidas en el ambiente y la composición de la matriz de la muestra.
El uso de plaguicidas en zonas cercanas a cuerpos de agua, establece la
necesidad de realizar análisis de estas sustancias a bajos niveles de concentración o
por debajo de los establecidos por los organismos de protección ambiental (4).
Los plaguicidas carbamatos, constituyen uno de los grupos de
plaguicidas más utilizados en la agricultura, tanto a nivel mundial como en Venezuela. La
Agencia de Protección Ambiental de los Estados Unidos (EPA, Environmental Protection
Agency) ha reportado que el 80% de todos los casos por intoxicación con plaguicidas son
debidos al grupo de los carbamatos y organofosforados (16).
Existen varios métodos para la extracción líquido - líquido de
plaguicidas en muestras de aguas, (9, 13) sin embargo las extracciones en fase sólida (1,
5, 9, 10) se han convertido en los últimos años en un método mas eficiente, ya que
reduce el tiempo de análisis obteniéndose recuperaciones superiores a las extracciones
líquido - líquido.
El propósito del presente trabajo fue lograr las condiciones adecuadas
para la separación cromatográfica en fase gaseosa de 8 plaguicidas carbamatos y
optimizar una metodología de extracción líquido - sólido de los plaguicidas en
muestras de aguas naturales usando cartuchos de carbón grafitado.
Materiales y métodos
Plaguicidas de alta pureza (Dr. Ehrenstorfer Gmbh, Alemania), se
emplearon para preparar las soluciones madre de 1000 y 2000 µg/mL de Aldicarb, Propham,
Propoxur, Chlorpropham, Bendiocarb, Carbofuran, Pirimicarb y Carbaryl en acetato de etilo
grado HPLC (J.T. Baker). Las soluciones patrón empleadas en la calibración se prepararon
por dilución a partir de las soluciones madre en acetato de etilo y las soluciones
empleadas para el salpicado se prepararon en metanol grado HPLC (J.T. Baker). Se empleó
trifenílfosfato sólido (Riedel de Haën) al 99 % de pureza como estándar interno. Se
preparó una solución madre de 1000 µg/mL en acetato de etilo.
Para la optimización de la separación cromatográfica de los 8
plaguicidas carbamatos y el estándar interno (E.I.), se prepararon soluciones patrón de
los plaguicidas y del E.I. Trifenílfosfato en el intervalo de 0,1 - 5,0 µg/mL; se
procedió a realizar inyecciones individuales de 1,0 ml, con diferentes condiciones de
operación del equipo cromatográfico, empleando isotermas y rampas de calentamiento, con
el fin de lograr una óptima separación de los analitos y los tiempos de retención de
cada uno de estos, para su identificación. La cuantificación se realizó por el método
del estándar interno. Las curvas de calibración se obtuvieron por inyección de
soluciones patrón de cada plaguicida y el estándar interno.
Se utilizó un cromatógrafo de gases, Auto System Perkin-Elmer,
equipado con un detector termoiónico (nitrógeno - fósforo), un muestreador automático
Perkin-Elmer (14), un inyector de válvula usado en modo splitless, una columna capilar de
30 m x 0,53 mm ID x 1,2 mm de espesor de película de 5% fenil 95% metil silicona (AT-5
Alltech), el registro de los cromatogramas y la integración del área de los picos se
realizó en una computadora personal, equipada con un software Nelson 2600 (Manual de
Instrucciones del Sistema de Integración 2600, Perkin-Elmer Hispania S.A., Departamento
de Asistencia al Usuario, Grupo de Soporte y Aplicaciones).
Los gases empleados en el análisis cromatográfico fueron He, H2 y
aire sintético y en el procedimiento de extracción N2 (todos de alta pureza,
suministrados por AGA de Venezuela).
En el procedimiento de extracción se emplearon cartuchos conteniendo
250 y 400 mg de carbón grafitado (Envicarb, SUPELCO), sobre un soporte conectado a una
bomba de vacío (GAST).
El acondicionamiento del cartucho de carbón grafitado, en todos los
casos, se realizó con 5,0 mL de mezcla acetato de etilo/acetona (80:20), 1,0 mL de
acetona grado HPLC (Fisher) y 14 mL de ácido acético al 2 % v/v (ácido acético glacial
grado análisis, Fisher).
Para la optimización de la extracción líquido - sólido de los
plaguicidas Carbamatos, se dispuso de muestras de agua desionizada, destilada, potable y
de río. En estos ensayos se experimentaron extracciones bajo seis condiciones diferentes
(cuadro 1), se emplearon diversos volúmenes de muestras de agua, salpicada con una mezcla
metanólica de los 8 plaguicidas a niveles entre 10,0 y 20,0 µg/l. Las muestras (agua
destilada, potable y de río) fueron filtradas utilizando filtros de membrana de celulosa
de 0,45 µm de poro y 47 mm de diámetro (Whatman) con la finalidad de eliminar cualquier
particulado proveniente de la muestra; se adicionó NaCl, se agitó por un minuto y se
pasó a través del cartucho a diferentes flujos (cuadro 1), previamente acondicionado.
Luego el cartucho se secó al vacío durante 20 min.
Los plaguicidas retenidos en el cartucho se eluyeron empleando dos
formas de elución: 1) Cartucho en Posición Normal y 2) Cartucho en Posición Normal e
Invertida (cuadro 1); con porciones de acetona y porciones de la mezcla acetato de
etilo/acetona (80:20), los extractos se recogieron en tubos de ensayo conteniendo
aproximadamente 1 g de Na2SO4 anhidro. Los extractos se evaporaron bajo una corriente de
N2 en un baño a 35 °C hasta un volumen final de 1,0 mL. Estos extractos se transfirieron
a un vial, donde se le salpicó el estándar interno Trifenílfosfato (TPP) y se inyectó
un volumen de 1,0 µL en el Cromatógrafo de gas.
La eficiencia de la metodología de extracción se evaluó calculando
los porcentajes de recuperación de cada plaguicida con la siguiente expresión:
Resultados y discusión
Separación Cromatográfica.
Se realizaron ensayos a diferentes temperaturas en condiciones
isotérmicas con la columna capilar utilizada, sin lograrse buenas separaciones de los 8
plaguicidas Carbamatos. Sin embargo, el empleo de un programa de calentamiento del horno,
que se presenta en el (cuadro 2) aunado a las demás condiciones, permitió obtener una
adecuada separación cromatográfica.
La columna mostró buenas separaciones y áreas de picos bien
definidas, los tiempos de retención permitieron diferenciar un componente de otro. No se
observaron solapamientos. El tiempo total de la corrida cromatográfica fue de 30 min.
La fase estacionaria (5% fenil 95% metilsilicona) es una fase no polar,
lo que se comprueba con la rápida elución de los plaguicidas polares y la tardía
elución de los plaguicidas menos polares (cuadro 3).
Optimización de la metodología de extracción con carbón grafitado.
Los resultados obtenidos bajo la condición 1 descrita en la parte experimental, muestra
recuperaciones entre 47 y 87%, para los plaguicidas Propham (74%), Chlorpropham (70%),
Carbofuran (87%) y Carbaryl (84%). El resto de los carbamatos no se ubicaron dentro del
intervalo optimo de recuperación sugerido por la EPA (1) (entre 70 y 130%). La baja
recuperación para Aldicarb (47%), Propoxur (48%), Bendiocarb (63%) y Pirimicarb (56%)
puede deberse, probablemente a la cantidad de muestra que atraviesa el cartucho durante la
extracción, lo que contribuye a eluir algunos analitos (9, 11, 15).
Cuadro 1. Condiciones de Extracción de los plaguicidas carbamatos.
Condición |
Miligramos de Carbón Grafitado |
Volumen de Muestra (mL) |
Flujo (mL/min.) |
Elución |
1 |
250 |
1000 |
50 |
- Posición Normal: 2 x 0,5 mL Acetona 3 x 2,5 mL Acetato de Etilo/Acetona
(80:20) |
2 |
250 |
1000 |
5
20
85 |
* |
3 |
250 |
250 |
5
20 |
* |
4 |
250 |
100 |
5
20
85 |
* |
5 |
400 |
100 |
5
50 |
* |
6 |
250 |
100 |
5 |
- Posición Invertida: 2 x 0,5 mL Acetona 2 x 2,5 mL Acetato de
Etilo/Acetona (80:20) - Posición Normal: 2 x 2,5 mL Acetato de Etilo/Acetona (80:20) |
* Forma de elución, la misma que en la condición 1.
Cuadro 2. Condiciones instrumentales óptimas de la Cromatografía
Gaseosa.
Cromatógrafo |
Auto System, Perkin-Elmer |
Gas de arrastre |
Helio a 10 mL/min. |
Gases del detector |
Hidrógeno a 1.70 mL/min. |
|
Aire a 100 mL/min. |
Temperatura del inyector |
250 °C |
Temperatura del detector |
280 °C |
Umbral del detector |
0.75 mV |
Programa del horno |
0.80 min. a 60 °C |
|
rampa 1: 40 °C/min. hasta 160 °C |
|
rampa 2: 3,5 °C/min. hasta 230 °C |
|
rampa 3: 8 °C/min. hasta 280 °C por 1 min. |
Inyección |
Modo "splitless" con abertura de válvula a los 0.80 min. |
Método de cuantificación |
Estándar Interno |
En la siguiente etapa del desarrollo de la metodología de extracción
se procedió a incrementar la cantidad de NaCl a 10 g y se realizaron extracciones a tres
flujos distintos 85, 20 y 5 mL/min., los ensayos realizados bajo la condición 2 de
extracción, permitieron obtener recuperaciones adecuadas para Bendiocarb (108,5%),
Carbofuran (71,18%) y Carbaryl (116%); cuando se realizó el ensayo de extracción a un
flujo de 85 mL/min.
Cuadro 3. Tiempos de retención y factores de respuestas relativos a
Trifenílfosfato empleando el detector termoiónico (NPD).
Nº |
Plaguicidas |
Tiempos de retención (min.) |
Factor de repuesta relativa |
1 |
Aldicarb |
2,92 |
0,121 |
2 |
Propham |
7,78 |
0,105 |
3 |
Propoxur |
10,62 |
0,025 |
4 |
Clorpropham |
11,42 |
0,061 |
5 |
Bendiocarb |
11,85 |
0,003 |
6 |
Carbofuran |
13,45 |
0,001 |
7 |
Pirimicarb |
16,12 |
0,451 |
8 |
Carbaryl |
17,48 |
0,004 |
9 |
Trifenílfosfato |
28,37 |
1,000 |
Intervalo de concentración 0,1 - 5,0 µg/mL, n = 10
El ensayo de extracción que se realizó a un flujo de 20 mL/min.,
muestra que los plaguicidas carbamatos que presentaron óptimas recuperaciones son
Bendiocarb (105%) y Carbofuran (82,72%), el resto de los carbamatos no se recuperaron,
probablemente debido a su elución con el paso de la muestra (3, 9, 11, 15).
Para la extracción a 5 mL/min., son recuperados eficientemente los
plaguicidas carbamatos Propham (73,19%), Propoxur (104%), Bendiocarb (115%), Carbofuran
(110%) y Carbaryl (76%).
Con la condición 3; a un flujo de 20 mL/min., la mayoría de los
carbamatos no se recuperó eficientemente (por debajo de 39%), lo cual indica que a este
flujo no es adecuada la extracción de los plaguicidas. Una de las posibles razones que
puedan explicar la no-recuperación de los plaguicidas podría estar relacionada con su
polaridad y el flujo de extracción, ya que en este caso los plaguicidas estarían menos
tiempo en contacto con el sólido para que ocurra la adsorción de estos.
A un flujo de 5 mL/min. se recuperan sólo 3 de los 8 plaguicidas,
Bendiocarb (92,67%), Carbofuran (84,57%) y Carbaryl (104,0%). Cuando se ejecuta la
extracción a este flujo se puede notar que un mayor número de plaguicidas es recuperado,
ya que el tiempo de estadía de estos por la fase sólida es mayor, en comparación a
cuando se realiza a un flujo de 20 mL/min.
Con el fin de maximizar la eficiencia de recuperación obtenida, se
redujo el volumen de muestra como se describe en condición 4 de extracción. Los
porcentajes de recuperación a un flujo de 85 mL/min. no son satisfactorios ya que ninguno
de los analitos se recuperó eficientemente, lográndose el mayor valor de recuperación
para Carbaryl (60,41%).
Cuando se realizó la extracción a un flujo de 20 mL/min se observa
que los porcentajes de recuperación estuvieron entre 18,57 y 125,0% y sólo se recuperan
eficientemente Bendiocarb (86,0%) y Carbaryl (125,0%).
En ambos casos cuando se experimenta la extracción de los plaguicidas
a flujos de 85 y 20 mL/min. la eficiencia es pobre. Esto pudiese estar asociado al flujo
de extracción, ya que como algunos plaguicidas son polares, la fase sólida con la que se
extrae compite en la adsorción de estos compuestos junto con la muestra (7, 4, 11, 15).
Cuando la extracción se realizó a un flujo de 5 mL/min. se observó
que los porcentajes de recuperación variaron entre 80,97 y 128,0% lográndose eficientes
recuperaciones para los 8 carbamatos, Aldicarb (91,36%), Propham (83,96%), Propoxur
(98,12%), Chlorpropham (81,96%), Bendiocarb (90,7%), Carbofuran (86,88%), Pirimicarb
(80,97%) y Carbaryl (128,0%).
Para estudiar el efecto de adsorción de los plaguicidas en la fase
sólida, se empacaron cartuchos con 400 mg de carbón grafitado (condición 5). Las
recuperaciones fueron eficientes para 7 de 8 plaguicidas flujos de 5 y 50 mL/min,
recuperándose satisfactoriamente Aldicarb (77,0%), Propham (76,0%), Propoxur (74,0%),
Chlorpropham (85,0%), Bendiocarb (93,0%), Carbofuran (97,0%) y Pirimicarb (90,0%) a 5
mL/min.
A un flujo de 50 mL/min., se observa que igualmente se recuperan 7 de
los 8 carbamatos, Aldicarb (91,0%), Propham (76,0%), Propoxur (89,0%), Chlorpropham
(85,0%), Bendiocarb (105,0%), Carbofuran (98,0%) y Pirimicarb (80,0%).
Con el propósito de incrementar la eficiencia de extracción del
cartucho de carbón grafitado (250 mg), se procedió a ensayar la separación de los
plaguicidas carbamatos en muestras de aguas, tal como se describe en la condición 6. Se
modificó la etapa de elución invirtiendo la posición del cartucho de carbón grafitado.
(7, 8, 2).
En este ensayo se recuperaron eficientemente los 8 carbamatos,
obteniéndose recuperaciones dentro del rango de eficiencia de la EPA; Aldicarb (110,0%),
Propham (90,0%), Propoxur (85,0%), Chlorpropham (98,0%), Bendiocarb (91,0%), Carbofuran
(105,0%) y Carbaryl (88,0%). Los resultados obtenidos con este ensayo permitieron
recuperar eficientemente un mayor número de plaguicidas en comparación con los
anteriormente discutidos (figura 1).
Resultados similares obtienen Crescenzi et al. (2), empleando
esta modalidad de elución: Aldicarb (96,0%), Carbaryl (97,0%), Pirimicarb (95,0%),
Propham (95,0%) y Propoxur (95,0%), y Di Corcia et al. (8), con Aldicarb (92,0%).
Figura 1. Eficiencia en la recuperación de plaguicidas carbamatos
utilizando cartuchos de 250 mg de Carbopack. Flujo 5 mL/min, 100 mL H2O y 5 g
NaCl, cartucho invertido (condición 6).
Conclusiones
En función de los resultados obtenidos para cada condición ensayada,
se seleccionó como mejor condición de extracción, la descrita como condición 6
(elución con cartucho invertido), por permitir una mayor eficiencia en la extracción de
los 8 carbamatos estudiados dentro de un intervalo óptimo de porcentaje de recuperación
de 85 y 105% con coeficientes de variación entre 1,66 y 8,25% respectivamente.
Agradecimientos
Al Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Tecnológicas
(CONICIT) por el financiamiento para la adquisición del Cromatógrafo de Gas y al Consejo
de Desarrollo Científico y Humanístico de L.U.Z (CONDES) por el financiamiento del
proyecto No. 1096-94.
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